iptg的优点
1.能诱导酶的合成,但又不被分解的分子,称为安慰诱导物。由于乳糖虽可诱导酶的合成,但又随之分解,产生很多复杂的动力学问题,因此人们常用安慰诱导物来进行各种实验。
2.iptg不被菌体代谢,为乳糖类似物,一旦进入细胞就会产生持续长久的诱导效果,所以iptg的诱导效率高,往往只需要很少量(1mmol/l)即可达到理想诱导效果。由于iptg不被代谢,在胞内专一诱导外源蛋白的表达。不受细胞代谢的影响,诱导效果持续稳定。乳糖有双效作用,既能做为诱导剂异乳糖的前体物质,又可以做碳源,在诱导过程中,很不稳定,iptg因其优异的稳定性决定了它适合做实验研究用。
3.iptg能在缺乏lacy基因下而有效地被抄送。
4.半乳糖苷键中用硫代替了氧,失去了水解活性,但硫代半乳chemicalbook糖苷和同源的氧代化合物与酶位点的亲和力相同,iptg虽不为β–半乳糖苷酶所识别,但它是lac基因簇十分有效的诱导物。使用方法:首先把iptg配制成23.83mg/ml(100mm)的水溶液,并进行过滤除菌后保存。然后在100ml的琼脂培养基中,加入100μl的上述溶液、200μl的x-gal(20mg/ml的二甲基甲酰胺(dmf)溶液)和100μl的amp(100mg/ml),制作成iptg、x-gal、amp平板培养基。当dna片段插入至puc系列载体(或其他带有lacz、amp基因载体),然后转化至lacz缺失细胞中后,涂布上述的iptg、x–gal、amp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有dna插入片段的基因重组体)。
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